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本试剂盒采用聚合物技术将HRP连接到二抗IgG分子上形成多聚物分子，替代了传统方法中的二抗和三抗，直接放大抗原抗体结合的信号。本试剂盒的检测原理为，酶标IgG聚合物与组织切片上的一抗结合，再加入DAB显色液，聚合物上的HRP可以催化DAB显色液中的H2O2分解，使联苯胺氧化变成联苯亚胺，在组织切片的一抗结合的抗原位点上出现黄色或棕黄色着色。本试剂盒适用于石蜡切片、冰冻切片和细胞涂片。

• 酶标二抗IgG聚合物分子的敏感性和放大效应优于三步法。
  
• 由于本试剂盒没有使用生物素，从而可以避免可能由生物素引起的非特异性背景显色。

• DAB显色组分避免反复冻融，可分装保存。
  
• 为获得最佳实验结果，请务必优化DAB显色时间。
  
• 建议在实验过程中设置阳性与阴性对照，以防止假阳性或假阴性的结果。
  
• 一抗的稀释度、孵育时间、温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度弱时，可提高一抗浓度或延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度或缩短孵育时间，增加洗涤次数或延长洗涤时间。
  
• 本试剂盒中的DAB色原为致癌物质，操作中应采用合理的防护措施。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 免疫组织化学染色的准备工作
  DAB显色工作液的配制：按照1mL DAB缓冲液分别加入20×DAB底物和20×DAB色原各50μL的比例稀释，混匀，即为DAB显色工作液。可根据用量的需要，等比例的扩大或缩小各试剂的体积。DAB显色工作液须避光现用现配。
  
• 石蜡切片染色
  
  • 切片常规脱蜡至水。
    
  • 对组织进行相应的抗原修复。
    
  • 滴加100μL内源性过氧化物酶阻断剂，室温孵育10～15min，以阻断内源性过氧化物酶的活性。
    
  • PBST冲洗，5min×3次。
    
  • 滴加100μL封闭液，室温避光孵育30～45min，倾去，不洗。
    
  • 滴加适当比例稀释的一抗，避光37℃孵育2-3h或4℃过夜，次日再室温孵育1h。
    
  • PBST冲洗，5min×3次。
    
  • 滴加50μL酶标抗兔IgG聚合物，避光室温或37℃孵育30～60min。
    
  • PBST冲洗，5min×3次。
    
  • 滴加100μL DAB显色工作液，避光室温显色3～30min，可在显微镜下控制显色时间。蒸馏水冲洗。
    
  • 如果需要，可进行苏木素复染。
    
  • 常规脱水、透明、封片。
• 血涂片、冰冻切片和细胞涂片染色
  血涂片、冰冻切片和细胞涂片经固定后，步骤同石蜡切片2-12。